Extração de DNA de morango
Roteiro para extração de DNA de morango
Materiais necessários:
-saco plástico
– morangos frescos
-1 peneira
– tubos de ensaio
-1 béquer de 500mL
-1 béquer de 250mL
-suporte para tubos de ensaios
-1 béquer com 150mL de solução de extração de DNA
-detergente
-sal
-1 funil
-água
-álcool etílico (92,8 INPM) gelado
Procedimentos:
Colocar os morangos dentro de um saquinho plástico para maceração e pressionar entre os dedos até obter uma pasta quase homogênea.
Em um béquer, preparar a solução de extração de DNA, misturando 150 mL de água, uma colher de sopa de detergente e uma colher de chá de sal de cozinha. Mexer bem, porém cuidadosamente para não fazer espuma. Para facilitar o processo, podemos usar água morna.
Colocar cerca de 50 mL da solução de extração do DNA sobre a massa do morango, vedar o saco plástico e misturar levemente .
Colocar uma peneira sobre um béquer limpo e passar a mistura para retirar os pedaços de morango.
Dividir o líquido resultante em dois ou três tubos de ensaio com o auxílio do funil. Colocar apenas cerca de 3 dedos no fundo do tubo.
Despejar delicadamente sobre a solução nos tubos uma quantidade de álcool maior que o volume do morango.
Aguardar cerca de 3 minutos para o DNA começar a precipitar, ocorrendo a separação de pectina (fase superior) e do DNA (fase intermediária). O DNA está um pouquinho acima do extrato de morango.
A adição do sal (NaCl) proporciona ao DNA um ambiente adequado. O sal contribui com íons positivos que neutralizam a carga negativa do DNA. Numerosas moléculas de DNA podem coexistir nessa solução.
O detergente afeta as membranas porque elas são formadas por lipídeos. Com a ruptura das membranas o conteúdo celular, incluindo as proteínas e o DNA, soltam-se e dispersam-se na solução. A função de algumas dessas proteínas é manter o DNA enrolado numa espiral muito apertada
Ao colocar o álcool bem gelado na solução de extração misturada com o morango macerado, foi possível observar a precipitação da fita de DNA, isso ocorreu devido ao fato de a proteína DNA ser insolúvel em álcool, ou seja, ela não se dissolve no álcool, tornando possível sua visualização. . O DNA é menos denso que a água e a mistura aquosa dos restos celulares.